凡人修煉脂質(zhì)體秘籍3----輔料總覽篇

上篇講到在脂質(zhì)體處方中，磷脂，膽固醇等輔料有非常重要的作用，本篇主要簡要講述脂質(zhì)體輔料概述，脂質(zhì)體輔料的法規(guī)指南要求，分類等方面，詳細(xì)的重要輔料介紹，后面陸續(xù)有分章節(jié)的講述。

1.脂質(zhì)體輔料概述

脂質(zhì)體系一種人工細(xì)胞膜，它具有洋蔥似的封閉球形結(jié)構(gòu)，可使藥物被保護(hù)在它的結(jié)構(gòu)中，發(fā)揮定向作用，特別適于作為抗癌藥物載體，以改善藥物的治療作用，降低毒副作用等。脂質(zhì)體由磷脂為骨架膜材及附加劑組成。用于制備脂質(zhì)體的磷脂類包括天然磷脂和合成磷脂二類。天然磷脂以卵磷脂(磷脂酰膽堿，PC)為主，來源于蛋黃和大豆，顯中性，含大量雜質(zhì)，易氧化降解，由天然磷脂組成的脂質(zhì)體，藥物滲漏性較大，不易保存。合成磷脂主要有DPPC、DPPE、DSPC等，其均屬氫化磷脂類，具有性質(zhì)穩(wěn)定，抗氧化性強，成品穩(wěn)定等特點，是目前國外的輔料。

制備脂質(zhì)體，還需一些附加劑，比如膽固醇，它也是兩親性物質(zhì)，與磷脂混合使用，可制備穩(wěn)定的脂質(zhì)體，其作用是調(diào)節(jié)雙分子層流動性，減低脂質(zhì)體膜的通透性。其它附加劑有十八胺、磷脂酸等，這兩種附加劑可改變脂質(zhì)體表面電荷的性質(zhì)。制備時也有采用氯化鈉等鹽類或緩沖鹽作為溶劑或穩(wěn)定劑。

在長循環(huán)脂質(zhì)體中會用到PEG脂質(zhì)，比如DSPE-MPEG2000等。在脂質(zhì)體工藝中，也會采用特殊的輔料，如中國臺灣智擎公司研制的伊立替康脂質(zhì)體Onivyde®，采用蔗糖八硫酸鹽梯度載藥。凍干脂質(zhì)體一般采用蔗糖或海藻糖作凍干保護(hù)劑。

2.發(fā)布的指南文章對脂質(zhì)體輔料要求

2.發(fā)布的指南文章對脂質(zhì)體輔料要求

2.1國外有2015年 FDA Liposome Drug Products脂質(zhì)體藥物制藥工業(yè)指南草案。

對輔料要求如下：脂質(zhì)成分的控制：

脂質(zhì)成分的質(zhì)量，包括改良性脂質(zhì)（如聚乙二醇修飾的脂質(zhì)，PEG），可能影響脂質(zhì)體藥品的質(zhì)量和性能。在使用全新的脂質(zhì)時，該脂質(zhì)在所提交申報資料中的詳細(xì)程度應(yīng)與藥物的相同。除此以外，還應(yīng)提交以下脂質(zhì)相關(guān)的具體信息：

a. 脂質(zhì)成分的性狀和特征

如果選定脂質(zhì)為合成或半合成的，如二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿（DMPC），應(yīng)提交結(jié)構(gòu)證明，包括脂肪酸組成和特異構(gòu)象。應(yīng)提交具體的脂質(zhì)組成（如各種脂質(zhì)和脂肪酸百分比，?；湹奶禺悩?gòu)型，以及脂肪酸的飽和度）。如果是自然來源的脂質(zhì)混合物（如卵磷脂），應(yīng)提交各單一脂質(zhì)及其脂肪酸的百分含量范圍。

b. 脂質(zhì)成分的生產(chǎn)

不論是合成、半合成還是自然提取，脂質(zhì)成分的生產(chǎn)信息都應(yīng)提交。對于合成和半合成脂質(zhì)，我們建議提交以下信息： i. 如適用，應(yīng)提供合成工藝和純化過程的完整描述ii. 起始物料，原材料、溶劑和試劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)iii. 關(guān)鍵步驟和中間體的控制，如適用，應(yīng)包括側(cè)鏈?；鶚?gòu)型特異性的生產(chǎn)控制。

對于自然來源的磷脂混合物，和任何自然來源的，用于半合成工藝起始片段物料，應(yīng)提交以下信息： i. 生物來源（如雞蛋）ii. 動物源材料的來源國iii. 供應(yīng)商iv. 提取和純化過程的描述，如適用。應(yīng)描述相關(guān)過程，適用時確保避開、去除、和/或動物蛋白、病毒及任何其它感染劑。在生產(chǎn)過程中，應(yīng)通過確定恰當(dāng)?shù)目刂品椒ǎ鉀Q避免、和/或去除熱源物質(zhì)和細(xì)菌內(nèi)毒素的問題。

c. 脂質(zhì)成分的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

應(yīng)提供生產(chǎn)藥品使用的各脂質(zhì)成分的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中涵蓋的以下信息。標(biāo)準(zhǔn)中含有： i.鑒別測試應(yīng)能區(qū)分目標(biāo)脂質(zhì)成分和具有相似結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)。ii.含量分析應(yīng)基于穩(wěn)定性指示的分析方法。iii.分析過程應(yīng)經(jīng)過驗證（驗證數(shù)據(jù)應(yīng)提交）。iv.應(yīng)包括雜質(zhì)檢測（見下方）。v. 對于自然來源的脂質(zhì)混合物（如卵磷脂），應(yīng)涵蓋的其它示例。檢驗如下： 1.脂肪酸側(cè)鏈的不飽和度。2.平衡離子含量和二價陽離子的限度。vi.對于合成脂質(zhì)或脂質(zhì)混合物，應(yīng)包括以下所示的檢驗：1.反式脂肪酸2.游離脂肪酸3.過氧化物4.溶血磷脂5.平衡離子含量與二價陽離子的限度。

應(yīng)提交雜質(zhì)相關(guān)的信息，包括合成副產(chǎn)物，如適用。雜質(zhì)是否必要鑒別和定量，取決以下信息： i.雜質(zhì)在脂質(zhì)體藥品中的含量ii.雜質(zhì)的已知毒性iii.結(jié)構(gòu)警示9（基因毒雜質(zhì)）對于合成脂質(zhì)（如DMPC）和半合成脂質(zhì)，應(yīng)使用能夠區(qū)分目標(biāo)脂質(zhì)與其雜質(zhì)（如HPLC）的分析方法檢驗，并用參比標(biāo)準(zhǔn)品或原料藥進(jìn)行比較。應(yīng)提供在脂質(zhì)成分檢驗中使用的參比標(biāo)準(zhǔn)品或原料藥的制備、資質(zhì)和儲存條件。

d. 脂質(zhì)組分的穩(wěn)定性

對于任何一種用于脂質(zhì)體生產(chǎn)的脂質(zhì)，都應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性研究和強降解測試（如高溫<如>、低溫<如冷凍>、光照、PH 值<強酸>和氧氣），以確定最佳的儲存條件和復(fù)檢期，明確降解特征，以及建立恰當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性指示的分析方法。

2.2國內(nèi)在2020-11-30頒布了鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液仿制藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）。

仿制藥的輔料種類和用量通常應(yīng)與參比制劑（RLD）相同。輔料的用量相同是指仿制藥輔料用量為參比制劑相應(yīng)輔料用量的95%—105%。

氫化大豆磷脂酰膽堿（HSPC）、膽固醇、培化磷脂酰乙醇胺（MPEG-DSPE）是本品的關(guān)鍵成分，應(yīng)按相關(guān)要求進(jìn)行登記和關(guān)聯(lián)，或由制劑注冊申請人一并提供研究資料。仿制藥應(yīng)與參比制劑選擇相同來源（天然的或合成的）的脂質(zhì)輔料，制定嚴(yán)格的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，并提供研究資料證明仿制藥所采用的脂質(zhì)輔料與參比制劑中的脂質(zhì)輔料相似（如，各組分比例）。

2.3中國藥審中心：2005年10月20日細(xì)胞毒類抗腫瘤藥脂質(zhì)體制劑專題會會議紀(jì)要 。

關(guān)于脂質(zhì)體制備所用關(guān)鍵輔料磷脂的質(zhì)量控制：目前國內(nèi)已有相應(yīng)的注射用（輔料）標(biāo)準(zhǔn)和口服標(biāo)準(zhǔn)。其中注射用標(biāo)準(zhǔn)檢查項目包括酸值、皂化值、碘值、水分、含磷量和含氮量測定。結(jié)合磷脂不穩(wěn)定的特點，從安全性的角度考慮，參考進(jìn)口磷脂的標(biāo)準(zhǔn)，檢查項目下要增訂溶血磷脂、過氧化物、無菌、熱原/細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查。鑒于注射用磷脂中磷脂酰膽堿的比例不同，制劑的性能可能有所不同，為保證終產(chǎn)品質(zhì)量的一致性，標(biāo)準(zhǔn)中建議增訂磷脂酰膽堿(PC)的檢查，具體的限度可結(jié)合在研制劑的需要確定。提高完善后的磷脂標(biāo)準(zhǔn)，建議做為脂質(zhì)體產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的附件。

2.4中國藥審中心關(guān)于脂質(zhì)體、乳劑注冊申報注意事項文章：審評三部 張寧注冊分類五中的特殊情況。

對輔料的要求：如上制劑的研制中通常會使用到較特殊的輔料，例如天然卵磷脂、合成卵磷脂等。部分輔料國內(nèi)已有生產(chǎn)，如天然卵磷脂。對于卵磷脂而言，國內(nèi)于1977年批準(zhǔn)了地方標(biāo)準(zhǔn)，其中僅對酸值、皂化值、碘值、水分、含氮量及含磷量進(jìn)行了控制，但是經(jīng)過二十多年的研究，國內(nèi)外對磷脂的質(zhì)量控制都有了一定的認(rèn)識，尤其是進(jìn)口輔料的質(zhì)量控制有了明顯提高，例如增訂了溶血性磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿以及磷脂酰乙醇胺等檢查項目。由于輔料的質(zhì)量密切影響到最終產(chǎn)品質(zhì)量，故提請申報單位關(guān)注所用輔料的質(zhì)量控制，建議在地方標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)產(chǎn)品控制的需要，建立切實可行的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。部分輔料可能需采用進(jìn)口產(chǎn)品,如合成磷脂等,提請申報單位關(guān)注輔料的合法來源，所用輔料應(yīng)獲得進(jìn)口注冊證。

2.5 CFDA 發(fā)布《藥物注射劑研發(fā)技術(shù)指導(dǎo)意見》征求意見稿2018年

對輔料要求：注射劑所采用的原料藥、輔料、包裝容器/材料須符合供注射用的質(zhì)量要求，并進(jìn)行登記、公示，與制劑共同審評。對于原料、輔料、包裝容器/材料應(yīng)建立完善的質(zhì)量保證體系，在雜質(zhì)（包括元素雜質(zhì)等）、微生物限度、熱原/細(xì)菌內(nèi)毒素等方面應(yīng)建立嚴(yán)格的控制措施和標(biāo)準(zhǔn)。藥物和輔料、包材的相容性應(yīng)符合要求。對于仿制藥應(yīng)盡量按照與參比制劑一致的原則選擇原料藥、輔料，通過質(zhì)量源于設(shè)計的原理進(jìn)行處方、工藝研究；對特殊類型注射劑，需客觀的、有針對性的評價原料、輔料和包裝材料間的相容性，并結(jié)合工藝過程確認(rèn)輔料的性質(zhì)對制劑特性的影響。注射劑中應(yīng)對抑菌劑的使用嚴(yán)格控制，原則上不建議使用抑菌劑。

3.脂質(zhì)體輔料的分類

3.1天然磷脂

此類主耍來源于大豆和蛋黃，也有從腦組織中獲得者。如磷脂酰絲氨酸。天然磷脂含大量不飽和鍵易被氧化，往往無明顯相轉(zhuǎn)變溫度，而且每種天然磷脂均是同類磷脂的混合物，化學(xué)上不是單組分，平均分子量約700。在脂質(zhì)體中應(yīng)用較少。

3.2合成和半合成磷脂

與天然磷脂比較不易氧化，組成固定，有明確相轉(zhuǎn)變溫度。更適宜于研究和生產(chǎn)，如二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二油?；字Ｄ憠A（DOPC）等，是應(yīng)用最多的脂質(zhì)體骨架膜材。

3.3衍生化磷脂

靶向技術(shù)一直是制劑發(fā)展的方向，其中分子靶向技術(shù)是研究熱點。在各種分子靶向載體中，PEG衍生化磷脂是目前應(yīng)用成熟度較高的一類。這種磷脂以PE為底物，在乙醇胺頭部連接生物相容性好的線性分子聚乙二醇（PEG），而聚乙二醇末端可進(jìn)一步連接各種配體。PEG衍生化磷脂可賦予制劑長循環(huán)特性和免疫特性，是微納米載藥體系實現(xiàn)靶向性的重要材料和手段，已經(jīng)越來越受到研究者的青睞。

3.4膽固醇

膽固醇不能單獨形成脂質(zhì)體，需與磷脂共同形成雙分子膜，用量一般為磷脂量的 20% 至50% (摩爾比)?？烧{(diào)節(jié)磷脂雙分子層膜的流動性，使膜通透性降低，減少藥物滲漏。同時可使脂膜維持一定柔韌性，增強脂質(zhì)體囊泡抗擊外部條件變化的能力。并對磷脂的氧化有一定保護(hù)作用。膽固醇對磷脂的相變具有雙相調(diào)節(jié)作用。

3.5蔗糖八硫酸鹽

蔗糖八硫酸酯X鹽是比較新的脂質(zhì)體輔料，為白色固體粉末。英文名：Sucrose octasulfate X，有實驗表明使用蔗糖八硫酸酯X鹽載藥，藥物治療指數(shù)、生物利用度、釋放及藥時曲線等體內(nèi)行為都有改善，因此鹽酸伊立替康脂質(zhì)體Onivyde®選擇其作為梯度載藥。國內(nèi)也有采用蔗糖八硫酸酯三乙胺鹽制備酒石酸長春瑞濱脂質(zhì)體，鹽酸伊立替康和鹽酸阿霉素共載脂質(zhì)體報道。

3.6蔗糖和海藻糖

脂質(zhì)體的凍干工藝中，蔗糖和海藻糖是常用的兩種保護(hù)劑。蔗糖同時能夠起到減少膜融合、保護(hù)脂質(zhì)體粒子不在凍干過程中破裂、泄露藥物的作用，同時能起到調(diào)節(jié)滲透壓的作用。與甘露醇、葡萄糖等相比它具有較高的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度和粘度保護(hù)效果更好一般用量在5%-10%。此外還能起到賦形劑的作用—對凍干后餅的形狀、疏松度、塌陷度等都有影響。使用蔗糖作為凍干保護(hù)劑的脂質(zhì)體制劑復(fù)溶后藥液穩(wěn)定性和復(fù)溶效果都很好。例如已上市的阿糖胞苷+柔紅霉素復(fù)方脂質(zhì)體Vyxeos就使用了蔗糖作為凍干保護(hù)劑。

而與蔗糖相比，海藻糖具有更高的的玻璃化相變溫度（120℃），因此海藻糖溶液更不容易形成冰晶。且海藻糖還具有神奇的水合能力：按每個葡萄糖單位算，海藻糖周圍的不凍水分子數(shù)是糖類最多，抗冷凍脫水能力更強。有研究表明，以10%濃度的海藻糖作保護(hù)劑的凍干脂質(zhì)體粒徑變化最小，保護(hù)效果好。

4.脂質(zhì)體輔料的選用

脂質(zhì)體輔料中，磷脂種類非常多，怎么選擇是最重要的。選擇那個磷脂主要取決于主藥性質(zhì)，怎么給藥，怎么釋藥，要求怎么樣的相轉(zhuǎn)變溫度，要求脂質(zhì)體表面什么荷電。磷脂分子有棒狀、錐狀和反錐狀三種不同的形狀，還有不同的親水親油平衡值，選用時需根據(jù)其形狀特性考慮是單獨使用還是應(yīng)與他種磷脂混合應(yīng)用。如棒狀磷脂分子在水中可形成雙分子層，可單獨形成脂質(zhì)體，如天然的磷脂、半合成卵磷脂、磷脂酰絲氨酸、雙磷脂酰甘油等。錐狀磷脂不能分散在水中，不能單獨形成脂質(zhì)體，但可與棒狀磷脂分子共同形成脂質(zhì)體，在有機溶劑中形成親水基聚集的雙分子層反膠團，如磷脂乙醇胺、雙磷脂酰甘油鈣、磷脂酸鈣（pH＜6.0）等。反錐狀磷脂分子是親水的，在水中形成膠團，不能單獨形成脂質(zhì)體，可與前兩種中任一種共同形成脂質(zhì)體，如溶血卵磷脂等。制備長循環(huán)脂質(zhì)體還會用到PEG衍生化磷脂。我們在選擇脂質(zhì)體輔料時，要充分了解磷脂分子的特點，選用不同的配比。

5.脂質(zhì)體輔料的相變及其預(yù)防措施

磷脂分子相變是在溫度影響下，脂肪酸烴鏈從有序狀態(tài)變?yōu)闊o序排列，使所具膜結(jié)構(gòu)由膠晶態(tài)變?yōu)橐壕B(tài)的現(xiàn)象，此溫度稱為相變溫度或相轉(zhuǎn)化溫度。用差示掃描量熱法測得的常用磷脂的相變溫度見下表。在相變溫度以下，磷脂分子的脂肪酸烴鏈為全反式構(gòu)象、排列緊密，因而膜的剛性、厚度增大，膜結(jié)構(gòu)處于晶態(tài)，缺少柔韌性；在相變溫度以上，溫度升髙，使脂肪酸烴鏈發(fā)生伸縮、扭曲運動，使膜橫切面積增加，厚度減少，膜流動性增加，膜結(jié)構(gòu)處于液晶態(tài)，膜的通透性增加，易使內(nèi)容物滲漏。相變不利于脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。

使用不同相變溫度的混合磷脂與膽固醇可增加穩(wěn)定性，膽固醇對磷脂的相變具有雙相調(diào)節(jié)作用。在相變溫度以上，膽固醇能抑制磷脂分子中脂肪酸烴鏈的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)化運動，減少歪扭構(gòu)象數(shù)量，來降低膜的流動性；在相變溫度以下，膽固醇能誘發(fā)磷脂分子的脂肪酸烴鏈產(chǎn)生歪扭構(gòu)象變化，阻止膠晶態(tài)出現(xiàn)，減少剛性，增加柔韌性。膽固醇也有類似增塑劑樣作用。在脂質(zhì)體處方中提高膽固醇的比例可增加脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，降低滲漏率。

常用磷脂的相變溫度

7.脂質(zhì)體輔料有登記號的品種簡介（AVT）

艾偉拓（上海）醫(yī)藥科技有限公司專注于脂質(zhì)體、脂肪乳、微納米靶向制劑、生物制劑注射劑領(lǐng)域。下表為該公司的脂質(zhì)體輔料品種。

目前，脂質(zhì)體的磷脂類輔料大多為進(jìn)口，主要是美德日企業(yè)。目前國內(nèi)銷售的人工合成磷脂主要有這幾個品牌：德國Lipoid GmbH，美國AVANTI，美國Genzyme，日本NOF，日本NFC這幾家公司。國內(nèi)輔料企業(yè)應(yīng)努力。

本篇對脂質(zhì)體輔料大致情況進(jìn)行了簡介，后續(xù)篇將對常用的脂質(zhì)體輔料逐一介紹。

參考文獻(xiàn)：

1.《藥劑輔料大全》羅明生 高天惠，四川科學(xué)技術(shù)出版社，2006年1月1日，第四十一章 脂質(zhì)體載體材料

2.2015年 FDA Liposome Drug Products脂質(zhì)體藥物制藥工業(yè)指南草案

3.中國藥審中心：2005年10月20日細(xì)胞毒類抗腫瘤藥脂質(zhì)體制劑專題會會議紀(jì)要

4.中國藥審中心關(guān)于脂質(zhì)體、乳劑注冊申報注意事項文章：審評三部 張寧  注冊分類五中的特殊情況

5.中國藥審中心2004年11月11日兩個腫瘤藥物脂質(zhì)體品種的專家咨詢會

6. 2020年AVT原輔料產(chǎn)品（供注射用）登記情況

7. AVT：說說藥用輔料中磷脂的發(fā)展歷程是怎樣的？

8.黃微崴，李哲，張小飛蔗糖八硫酸酯三乙胺梯度法制備重酒石酸長春瑞濱脂質(zhì)體，中國新藥雜志，2010（20）：1903-1906.

9.王永軍等人，一種鹽酸伊立替康和鹽酸阿霉素共載脂質(zhì)體及其制備方法，申請號：201811532448

11.海藻糖CAS號6138-23-4理化性質(zhì)與臨床應(yīng)用，艾偉拓（上海）醫(yī)藥科技有限公司